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如何選擇合適的二抗？

二抗是在其他宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)記物。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對每一個一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時間和費用。

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時在后繼實驗中也會有不同的檢測方案，如ELISA、WB、IHC、IF、IP、Flo等，因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮：

一抗的種屬來源：

二抗應(yīng)根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗，例如：如果一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗。

一抗的類別與亞型：

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配，通常是針對單克隆抗體而言。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種IgG,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗。

二抗的種屬來源：

二抗的種屬來源與其質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，不同來源的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實驗里，如雙標(biāo)實驗里，如果兩個一抗一個山羊來源，一個小鼠來源，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。

二抗的耦聯(lián)標(biāo)記：

耦聯(lián)到二抗上的標(biāo)記主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團（FITC、PE、Dylight等），生物素，金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于WesternBlot和ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實驗（細(xì)胞免疫化學(xué)、組織免疫化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)）中常用熒光基團標(biāo)記的二抗；免疫組化中也可以使用HRP或AP標(biāo)記的二抗。

二抗的純度：

親和層析純化相對于傳統(tǒng)的血清純化、鹽沉淀等方法更加高效，得到的抗體純度較高，產(chǎn)生的非特異性背景少，所以親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎。

血清吸附處理：

經(jīng)過血清吸附過的二抗排除了與相關(guān)物種組織可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的免疫球蛋白，因此將二抗與樣本的非特異性結(jié)合降低到最低。如經(jīng)過人血清吸附過的二抗，在檢測過程中就不會與樣本中人的免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。

西美杰代理的KPL品牌是專業(yè)親和純化二抗和底物顯色系統(tǒng)生產(chǎn)商，擁有40余年的產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗，2013年被知名體外診斷試劑供應(yīng)商SeraCare收購，深受廣大診斷企業(yè)好評。下表是KPL熱賣二抗推薦：

檢測物種	Unlabeled	HRP	AP	FITC	Cy3	Cy5
兔	5210-0174	5220-0336	5220-0308	5230-0426	5230-0359	5230-0372
小鼠	5210-0185	5220-0341	5220-0310	5230-0427	5230-0364	5230-0376
人	5210-0158	5220-0330	5220-0303	5230-0288	5230-0355	5230-0370
大鼠	5210-0179	5220-0364	5220-0377	5230-0301	5230-0361	-
山羊	5210-0170	5220-0362	5220-0384	5230-0294	5230-0358	5230-0371
雞	5210-0205	5220-0373	5220-0389	5230-0325	-	5230-0379
狗	5210-0195	5220-0368	5220-0387	5230-0314	-	-
猴	5210-0216	5220-0333	-	5230-0422	-	-
火雞	5210-0207	5220-0374	-	5230-0327	-	-
馬	5210-0201	5220-0370	5220-0380	5230-0320	-	-
貓	5210-0198	5220-0369	5220-0379	5230-0317	-	-
綿羊	5210-0204	5220-0372	5220-0388	5230-0324	-	5230-0378
牛	5210-0169	5220-0361	5220-0383	5230-0293	-	-
豚鼠	5210-0181	5220-0366	5220-0378	5230-0303	-	-
倉鼠	-	5220-0371	-	-	-	-
雪貂	-	-	5220-0320	-	-	-
豬	5210-0171	5220-0363	5220-0306	5230-0297	-	-
鴨	5210-0206	5220-0296	-	5230-0326	-	-
鹿	5210-0209	5220-0298	-	5230-0329	-	-
白足鼠	5210-0210	5220-0375	5220-0382	-	-	-
鏈霉親和素	-	5270-0029	5270-0030	5270-0028	5270-0022	5270-0023

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